肉的宰后嫩化注意归因于肌原植物合成仟维架构的毁损，肌原植物合成仟维架构是由内源性球淀粉酶质溶解酶吸附肌原植物合成仟维和组织核骨架球淀粉酶质会造成的。与一百多年来一直以来都是关心话题的钙球淀粉酶质酶各个，胱天球淀粉酶质酶（caspases）比较近被选为感兴致时题。胱天球淀粉酶质酶在组织核凋亡的进行关键期起着至关根本的影响，这其中caspase-3在去逝球淀粉酶质溶解中的影响是甲乙双方向和错综复杂的，但是指的进每一步的论述。S-亚硝基化能够 设定钙减少、势能排泄、球淀粉酶质质吸附和组织核凋亡来设定口感，涉及嫩度和持水程度。刚开始的论述知道S-亚硝基化也可以下降依赖于线粒体的caspase-3级联化学反应，这很有可能是肌肉群组织核凋亡和牛羊肉品味发展的因为。caspase-3的的论述内容是其与组织核凋亡的影响，以至于，很小有的论述研究方案S-亚硝基化设定caspase-3的制度化。

2024年9月由沈阳种植业社会张万刚老师团体在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生态学为该研究提供了亚硝基化突显组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

英文版标题格式：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

论文期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2025年干扰指数公式：5.7

撤稿用时：2024年9月

玩家公司：南京农业大学

的研究素材：蛋白

拜谱带来了枝术：亚硝基化修饰组学

技巧路线图：

一、深入分析可是

01.Caspase-3抗逆性

近几年尚不清理NO对caspase-3的抑拍摄用意义能否归因于NO介导的S-亚硝基化，有所差异浓度值均值的GSNO成为外源性NO供应信息，以引发caspase-3的体内S-亚硝基化。最终具体分析，与不会GSNO的组相对于，100、200和400μM GSNO组的caspase-3化学活化有效缩减（图1），与原本消息不符。GSNO操作缩减caspase-3化学活化的隐藏原由仍有待于具体分析。

图1 有差异溶液浓度的GSNO清理对caspase-3几丁质酶的印象

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化层度

实验Caspase-3的亚硝基化层面，以具体分析GSNO对Caspase-3的发应性。经GSNO工作后，检侧到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化密度添加（图2）。一些或许反映，外源性GSNO养成可成功的介导caspase-3的身体S-亚硝基化。另人咋舌的是，在不能GSNO普遍存在的比组中检侧到两个忽闪的S-亚硝基化带，这反映caspase-3可能会发现内源性的S-亚硝基化。不仅而且，本实验中caspase-3的S-亚硝基化层面较高，而caspase-3的吸附性减小，这与很久的实验同步。或许，caspase-3的非特异朋友S-亚硝基化淡化位点尚不看不清楚，还都要进步的宇宙探索。

图2 GSNO外理对caspase-3S-亚硝基化能力的危害

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化绘制组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的字段。蓝颜色符号的字段透露S-亚硝基化肽，黄色符号的C透露S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3挥发结球蛋白

结球蛋清有所作为一些更关键的受损細胞骨架球蛋清，在维护肌受损細胞组成的组成详细准确性和内缩性多方面起着更关键使用，研发S-亚硝基化caspase-3对结球蛋清生物挥发的脆弱性兼具着更关键重大意义。与Std（未用胱天球蛋清酶-3和GSNO孵育的默认值肌人造纤维素球蛋清）组不同于，0 μM GSNO组（肌原人造纤维素和caspase-3的孵育，无GSNO）的详细完成结球蛋清含水量偏态缩减，显示信息caspase-3对结球蛋清兼具着存在的球蛋清淀粉水解效果。在GSNO孵育后，详细完成结球蛋清的含水量很明显多（P < 0.05）。最后，当GSNO密度增大时，详细完成结球蛋清的含水量坚持上浮（P < 0.05）（图5）。某些察觉到取决于，SNO突显的caspase-3以总体水平信任的方式英文促使结球蛋清的生物挥发。

图5.S-亚硝基化caspase-3光降解结蛋白酶

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3吸附肌钙核蛋白-T

肌钙球蛋清-T (TnT)是原肌球球蛋清调试开展肌肉组织弯曲的丝条的一定要肌原人造弹性纤维棉球蛋清。TnT的吸附基本特征是检则到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化要求下，caspase-3对TnT的吸附具体情况如图已知6一样，与Std组（富含caspase-3和GSNO的肌原人造弹性纤维棉）差距，caspase-3组中30 kDa TnT电影细节描写相关系数加强，是因为caspase-3参与的了TnT的吸附，不仅如此，caspase-3与GSNO的孵育产生30 kDa TnT变低。在100和200 μM GSNO组中没了检则到强烈的对比分析(P > 0.05)，而当GSNO的有机废气浓度达到了400 μM 时，该电影细节描写相关系数增多(P < 0.05)。此类找到是因为了SNO呈现的caspase-3对TnT吸附的缓和用途。结球蛋清和TnT是caspase-3的太敏感底物，而GSNO进行处理有效降底caspase-3的抗逆性酶类将会产生肌原人造弹性纤维棉球蛋清吸附的程度有效降底。上面所论，NO诱发的S-亚硝基化能够 顺利通过呈现半胱氨酸残基来调试caspase-3的抗逆性酶类，以致进一步的一个脚印影向力其对结球蛋清和TnT的球蛋清电离技能，而影向力羊肉品行。

图6. S-亚硝基化caspase- 3溶解肌钙蛋白酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本浅论契机浅论S-亚硝基化对caspase-3绘制的的的影响和随即对牛羊肉肌原仟维休外降解塑料的的的影响。淀粉酶S-亚硝基化都可以绘制caspase-3的半胱氨酸残基，故而以至于caspase-3活性酶降低了，进的一步可抑制了其对牛羊肉肌原仟维淀粉酶的淀粉酶油脂水解作用。

三、拜谱工作小结

科研选用了酶活分析一下，亚硝基化绘制语组学分析一下，WB等加测的方法，知道蛋清S-亚硝基化可以绘制语caspase-3的半胱氨酸残基，这使得了caspase-3活性酶的消减，齐头并进这一步能够抑制了其对羊肉肌原合成纤维蛋清的蛋清蛋白酶质水解本事。本科研为解释清楚蛋清质亚硝基化对口感的政策调控新机制可以提供了一大个新的层面。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的淀粉酶质组学、表达淀粉酶质组学、分泌组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸全系列货品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺硝化作用、total空气氧化还原系统、氧化钙含量巯基，欢迎大家咨询！

规范期刊论文：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663